tumorsMalignant tumoursMalignant tumours2224-50572587-6813Rosoncoweb10.18027/2224-5057-2023-13-4-28-36tumors-1141Research ArticleОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯORIGINAL REPORTSСубпопуляционный состав опухоль-инфильтрирующих лимфоцитов при раннем и местнораспространенном тройном негативном раке молочной железы и его влияние на эффективность неоадъювантной химиотерапииSubpopulation structure of tumor-infiltrating lymphocytes in early and locally advanced triple negative breast cancer and its effect on the efficiency of neoadjuvant chemotherapyХорошиловМ. В.KhoroshilovM.  V.

Максим В. Хорошилов, врач-онколог отделения химиотерапии № 1

Москва

Maksim V. Khoroshilov, Oncologist, Chemotherapy Department No. 1

Moscow

maximkhoroshilov@gmail.comКоваленкоЕ. И.KovalenkoE.  I.

Елена И. Коваленко, к. м. н., старший научный сотрудник отделения химиотерапии № 1

Москва

Elena I. Kovalenko, MD, PhD, Senior Researcher, Department of Chemotherapy No. 1

Moscow

АртамоноваЕ. В.ArtamonovaЕ.  V.

Елена В. Артамонова, д. м. н., профессор, заведующая отделением химиотерапии № 1;

кафедра онкологии

Москва

Elena V. Artamonova, MD, PhD, DSc, Professor, Head of the Department of Chemotherapy No. 1;

Department of Oncology

Moscow

ЗаботинаТ. Н.ZabotinaТ.  N.

Татьяна Н. Заботина, д. б. н., заведующая отделом клинико-лабораторной диагностики

Москва

Tatyana N. Zabotina, MD, PhD, DSc Biol, Head of the Department of Clinical and Laboratory Diagnostics

Moscow

СтилидиИ. С.StilidiI.  S.

Иван С. Стилиди, д. м. н. профессор, академик РАН, директор

Москва

Ivan S. Stilidi, Academician of the Russian Academy of Sciences, MD, PhD, DSc, Professor, Director

Moscow

ЖуликовЯ. А.ZhulikovYa.  А.

Ярослав А. Жуликов, врач-онколог отделения химиотерапии № 1

Москва

Yaroslav A. Zhulikov, Oncologist, Chemotherapy Department No. 1

Moscow

ЕвдокимоваЕ. В.EvdokimovaЕ.  V.

Екатерина В. Евдокимова, врач-онколог отделения химиотерапии № 1

Москва

Ekaterina V. Evdokimova, Oncologist, Chemotherapy Department No. 1

Moscow

ПетровскийА. В.PetrovskyА.  V.

Александр В. Петровский, к. м. н., заместитель директора по образовательной деятельности, заведующий онкологическим отделением хирургических методов лечения №15;

доцент кафедры онкологии Института клинической медицины

Москва

Aleksandr V. Petrovsky, MD, PhD, Deputy Director, The Head of the Breast Cancer Surgical Department;

Associate professor in oncology

Moscow

ДенчикД. А.DenchikD.  А.

Данила А. Денчик, к. м. н., научный сотрудник онкологического отделения хирургических методов лечения №15 (комбинированного лечения опухолей молочной железы)

Москва

Danila A. Denchik, MD, PhD, Researcher, Oncology Department of Surgical Treatment Methods №15

Moscow

ВоротниковИ. К.VorotnikovI.  К.

Игорь К. Воротников, д. м. н., профессор, ведущий научный сотрудник хирургического отделения №15 (комбинированного лечения опухолей молочной железы)

Москва

Igor K. Vorotnikov, MD, PhD, DSc, Professor, Leading Researcher of the Oncology Department of Surgical Treatment Methods №15

Moscow

ШолоховВ. Н.SholokhovV.  N.

Владимир Н. Шолохов, д. м. н., профессор, ведущий научный сотрудник отделения ультразвуковой диагностики

Москва

Vladimir N. Sholokhov, MD, PhD, DSc, Professor, Leading Researcher of the Department of Ultrasound Diagnostics

Moscow

БердниковС. Н.BerdnikovS.  N.

Сергей Н. Бердников, к. м. н., заведующий отделением ультразвуковой диагностики

Москва

Sergey N. Berdnikov, MD, PhD, Head of the Department of Ultrasound Diagnostics

Moscow

ШоуаЭ. К.ShowaE.  K.

Эсма К. Шоуа, врач-онколог лаборатории клинической иммунологии

Москва

Esma K. Showa, Oncologist, Laboratory of Clinical Immunology and Innovative Technologies

Moscow

КадагидзеЗ. Г.KadagidzeZ.  G.

Заира Г. Кадагидзе, д. м. н., профессор, ведущий научный сотрудник лаборатории клинической иммунологии

Москва

Zaira G. Kadagidze, MD, PhD, DSc, Professor, Leading Researcher, Laboratory of Clinical Immunology and Innovative Technologies

Moscow

ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н. Н. Блохина» Минздрава РоссииРоссияN. N. Blokhin National Medical Research Center of OncologyRussian FederationФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н. Н. Блохина» Минздрава России; ФГБОУ ВО «РНИМУ им. Н. И. Пирогова» Минздрава РоссииРоссияN. N. Blokhin National Medical Research Center of Oncology; Russian National Research Medical University named after N. I. PirogovRussian FederationФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н. Н. Блохина» Минздрава России; ФГАОУ ВО «Первый МГМУ им. И. М. Сеченова» Минздрава России (Сеченовский Университет)РоссияN. N. Blokhin National Medical Research Center of Oncology; I. M. Sechenov Moscow Medical State UniversityRussian Federation2023130720231342836Copyright © Хорошилов М.В., Коваленко Е.И., Артамонова Е.В., Заботина Т.Н., Стилиди И.С., Жуликов Я.А., Евдокимова Е.В., Петровский А.В., Денчик Д.А., Воротников И.К., Шолохов В.Н., Бердников С.Н., Шоуа Э.К., Кадагидзе З.Г., 20242024Хорошилов М.В., Коваленко Е.И., Артамонова Е.В., Заботина Т.Н., Стилиди И.С., Жуликов Я.А., Евдокимова Е.В., Петровский А.В., Денчик Д.А., Воротников И.К., Шолохов В.Н., Бердников С.Н., Шоуа Э.К., Кадагидзе З.Г.Khoroshilov M.V., Kovalenko E. ., Artamonova Е.V., Zabotina Т.N., Stilidi I.S., Zhulikov Y.А., Evdokimova Е. ., Petrovsky А.V., Denchik D.А., Vorotnikov I.К., Sholokhov V.N., Berdnikov S.N., Showa E.K., Kadagidze Z.G.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.malignanttumors.org/jour/article/view/1141

Исследования последних лет показали, что тройной-негативный рак молочной железы (ТН РМЖ) характеризуется наибольшей мутационной нагрузкой и иммуногенностью по сравнению с другими молекулярно-генетическими подтипами, а также более высокой степенью инфильтрации опухоль-инфильтрирующими лимфоцитами (tumor-infiltrating lymphocytes — TILs), которые играют важнейшую роль в формирования противоопухолевого иммунитета и реализации ответа на лечение. Существенным недостатком стандартного иммуногистохимического метода определения TILs является невозможность полноценной оценки субпопуляционного состава иммунного инфильтрата, в том числе его минорных популяций.Целью данного исследования было изучение субпопуляционного состава лимфоидного инфильтрата при ТН РМЖ у пациентов, получавших неоадъювантную химиотерапию (НАХТ), и его влияние на достижение полного патоморфологического ответа на лечение (pCR = RCB 0).Материалы иметоды: В исследование включено 90 пациенток с первично-операбельным (40%) и неоперабельным местнораспространенным (60%) ТН РМЖ, получавших НАХТ по схеме: АС 1 раз в 2 недели, далее 12 еженедельных введений паклитаксел 80 мг/м2 + карбоплатин AUC2. Субпопуляционный состав TILs оценивался в образцах core-биопсии до начала НАХТ у всех больных. Анализ осуществлялся методом проточной цитофлуориметрии. Проведена клинико-иммунологическая оценка по следующим девяти субпопуляциям лимфоцитов: CD3+CD4+, CD3+CD8+, CD4+CD25highCD127–/low, CD3–CD19+, CD3–CD16+CD56+, CD3+CD16+CD56+, CD4+CD25+, CD8+CD279+, CD4+CD279+.Результаты: Частота pCR составила 51,1%. Общее содержание TILs в группах с полным и неполным патоморфозом (RCB 0 против RCB I–III) статистически не различалось (р = 0,271). При анализе субпопуляционного состава для популяций CD3+CD8+, CD3–CD16+CD56+, CD3+CD16+CD56+, CD3+CD4+, CD3–CD19+, CD4+CD25+, CD4+CD25highCD127–/low и CD4+CD279+ не было выявлено статистически значимых различий между медианными значениями в группах с полным и неполным патоморфозом. При исследовании популяции CD8+CD279+ выявлен более высокий уровень данных клеток у пациентов, достигших pCR/RCB 0 (медиана 18,6% против 12,3% при RCB I–III) (р = 0,033). При уровне CD8+CD279+ выше медианы (high) частота pCR составила 61,1% против 35% в подгруппе c содержанием CD8+CD279+ менее или равно медианы (low). Несмотря на отсутствие статистически значимых различий в содержании CD3+CD16+CD56+ (NKT-клеток) в группах с полным и неполным патоморфозом (р = 0,091), были выявлены численные различия в медианах: 9,9% и 8,3% соответственно. При уровне CD3+CD16+CD56+(NKT) выше медианы (high) частота pCR составила 63% против 35,7% в подгруппе c содержанием CD3+CD16+CD56+ менее или равно медианы (low). При выделении узкой подгруппы (CD8+CD279+ high и CD3+CD16+CD56+ high) частота полных патоморфологических регрессий в ней составила 87,5% против 27,3% при низких обоих показателях.Вывод: Таким образом, исходное высокое содержание CD8+CD279+ и CD3+CD16+CD56+ в опухоли явилось предиктором высокой чувствительности к НАХТ и ассоциировалось с большей частотой полных патоморфологических ответов.

Recent studies have shown that triple-negative breast cancer (TN BC) is characterized by the highest mutational load and immunogenicity compared to other subtypes, as well as the degree of tumor-infiltrating lymphocytes (TILs) infiltration, which play an important role in the development of antitumor immunity and treatment response. A significant disadvantage of the standard immunohistochemical method for determining TILs is the inability to fully assess the subpopulation structure of the immune infiltration, including minor populations.Aim: The evaluation of the subpopulations of breast cancer lymphoid infiltration in patients receiving neoadjuvant chemotherapy (NACT) and its influence on achieving a complete pathomorphological response (pCR = RCB 0).Materials and methods: The study included 90 patients who received NACT in following regimen: AC (doxorubicin 60 mg/m2  + cyclophosphamide 600 mg/m2 ) every 2 weeks, followed by 12 weekly infusions of paclitaxel 80 mg/m2  + carboplatin AUC2. The TILs subpopulations were evaluated in core-biopsy samples prior to the NACT in all patients. The analysis performed by flow cytofluorimetry. Clinical and immunological analysis was performed for the following 9 lymphocyte subpopulations: CD3+CD4+, CD3+CD8+, CD4+CD25highCD127– / low, CD3–CD19+, CD3–CD16+CD56+, CD3+CD16+CD56+, CD4+CD25+, CD8+CD279+, CD4+CD279+.Results: The frequency of pCR was 51,1 %. The total TILs content in groups with pCR and non-pCR (RCB 0 vs RCB I–III) did not differ statistically (p = 0.271). The subpopulations analysis for CD3+CD8+, CD3–CD16+CD56+, CD3+CD16+CD56+, CD3+CD4+, CD3–CD19+, CD4+CD25+, CD4+CD25highCD127– / low and CD4+CD279+ revealed no statistically significant differences between the median values in the groups with pCR and non-pCR. A study of the CD8+CD279+ population showed a higher level of these cells in patients achieved pCR / RCB 0 (median 18,6 % vs 12,3 % with RCB I–III) (p = 0.033). With CD8+CD279+ above the median (high, > Me), the pCR frequency was 61 % vs 35 % in the subgroup with CD8+CD279+ less than or equal to the median (low, ≤Me). Despite the absence of statistically significant differences in the content of CD3+CD16+CD56+(NKT-cells) in groups with pCR and non-pCR (p = 0.091), numerical differences in medians were revealed: 9,9 % and 8,3 %, respectively. At the same time, with CD3+CD16+CD56+(NKT) > Me (high), the pCR frequency was 63 % vs 36 % in the subgroup with CD3+CD16+CD56 + ≤Me (low). When selecting a narrow subgroup (CD8+CD279+ high and CD3+CD16+CD56+ high), the frequency of pCR was 87,5 % vs 27,3 % in the group with both low indicators.Conclusion: The high content of CD8+CD279+ and CD3+CD16+CD56+ in the tumor sample before the treatment start was a predictor of high sensitivity to NACT and is associated with a higher frequency of pCR.

рак молочной железынеоадъювантная химиотерапиясистемный иммунитетопухоль-инфильтрирующие лимфоцитыCD8+PD-1+NKTRCBbreast cancerneoadjuvant chemotherapysystemic immunitytumor-infiltrating lymphocytesCD8+ PD-1+NKTRCBReferencesSørlie T, Perou CM, Tibshirani R et al. Gene expression patterns of breast carcinomas distinguish tumor subclasses with clinical implications. Proc Natl Acad Sci U S A. 2001 Sep 11;98 (19):10869-74.Sørlie T, Perou CM, Tibshirani R et al. Gene expression patterns of breast carcinomas distinguish tumor subclasses with clinical implications. Proc Natl Acad Sci U S A. 2001 Sep 11;98 (19):10869-74.Castrellon AB, Pidhorecky I, Valero V et al. The Role of Carboplatin in the Neoadjuvant Chemotherapy Treatment of Triple Negative Breast Cancer. Oncol Rev. 2017 Mar 17;11 (1):324.Castrellon AB, Pidhorecky I, Valero V et al. The Role of Carboplatin in the Neoadjuvant Chemotherapy Treatment of Triple Negative Breast Cancer. Oncol Rev. 2017 Mar 17;11 (1):324.Sikov WM, Berry DA, Perou CM et al. Impact of the addition of carboplatin and/or bevacizumab to neoadjuvant once-per-week paclitaxel followed by dose-dense doxorubicin and cyclophosphamide on pathologic complete response rates in stage II to III triple-negative breast cancer: CALGB 40603 (Alliance). J Clin Oncol. 2015 Jan 1;33 (1):13-21.Sikov WM, Berry DA, Perou CM et al. Impact of the addition of carboplatin and/or bevacizumab to neoadjuvant once-per-week paclitaxel followed by dose-dense doxorubicin and cyclophosphamide on pathologic complete response rates in stage II to III triple-negative breast cancer: CALGB 40603 (Alliance). J Clin Oncol. 2015 Jan 1;33 (1):13-21.Spring LM, Fell G, Arfe A et al. Pathologic Complete Response after Neoadjuvant Chemotherapy and Impact on Breast Cancer Recurrence and Survival: A Comprehensive Meta-analysis. Clin Cancer Res. 2020 Jun 15;26 (12):2838-2848.Spring LM, Fell G, Arfe A et al. Pathologic Complete Response after Neoadjuvant Chemotherapy and Impact on Breast Cancer Recurrence and Survival: A Comprehensive Meta-analysis. Clin Cancer Res. 2020 Jun 15;26 (12):2838-2848.O’Meara T.A., Tolaney S.M. Tumor mutational burden as a predictor of immunotherapy response in breast cancer. Oncotarget. 2021; 12: 394-400.O’Meara T.A., Tolaney S.M. Tumor mutational burden as a predictor of immunotherapy response in breast cancer. Oncotarget. 2021; 12: 394-400.Артамонова Е.В. Роль иммунофенотипирования опухолевых клеток в диагностике и прогнозе рака молочной железы. Автореферат докт. дисс. – Москва. – 2003.Артамонова Е.В. Роль иммунофенотипирования опухолевых клеток в диагностике и прогнозе рака молочной железы. Автореферат докт. дисс. – Москва. – 2003.Wang, K. Tumor-infiltrating lymphocytes in breast cancer predict the response to chemotherapy and survival outcome: A meta-analysis / K. Wang, J. Xu, T. Zhang et al. // Oncotarget. –2016. – Vol. 7, N 28. – P. 44288-44298.Wang, K. Tumor-infiltrating lymphocytes in breast cancer predict the response to chemotherapy and survival outcome: A meta-analysis / K. Wang, J. Xu, T. Zhang et al. // Oncotarget. –2016. – Vol. 7, N 28. – P. 44288-44298.Park JH, et al. Prognostic value of tumour-infiltrating lymphocytes in patients with early-stage triple-negative breast cancers (TNBC) who did not receive adjuvant chemotherapy. Ann. Oncol. 2019; 30:1941–1949.Park JH, et al. Prognostic value of tumour-infiltrating lymphocytes in patients with early-stage triple-negative breast cancers (TNBC) who did not receive adjuvant chemotherapy. Ann. Oncol. 2019; 30:1941–1949.Denkert C, von Minckwitz G, Darb-Esfahani S, et al. Tumour-infiltrating lymphocytes and prognosis in different subtypes of breast cancer: a pooled analysis of 3771 patients treated with neoadjuvant therapy. Lancet Oncol. 2018;19 (1):40-50.Denkert C, von Minckwitz G, Darb-Esfahani S, et al. Tumour-infiltrating lymphocytes and prognosis in different subtypes of breast cancer: a pooled analysis of 3771 patients treated with neoadjuvant therapy. Lancet Oncol. 2018;19 (1):40-50.Loi, S. Tumor-infiltrating lymphocytes and prognosis: A pooled individual patient analysis of early-stage triple-negative breast cancers / S. Loi, D. Drubay, S. Adams et al. // J. Clin. Oncol. 2019. – Vol. 37, N 7. – P. 559-569.Loi, S. Tumor-infiltrating lymphocytes and prognosis: A pooled individual patient analysis of early-stage triple-negative breast cancers / S. Loi, D. Drubay, S. Adams et al. // J. Clin. Oncol. 2019. – Vol. 37, N 7. – P. 559-569.Goda N, Sasada S, Shigematsu H, Masumoto N, Arihiro K, Nishikawa H, Sakaguchi S, Okada M, Kadoya T. The ratio of CD8+ lymphocytes to tumor-infiltrating suppressive FOXP3 + effector regulatory T cells is associated with treatment response in invasive breast cancer. Discov Oncol. 2022 Apr 19;13 (1):27.Goda N, Sasada S, Shigematsu H, Masumoto N, Arihiro K, Nishikawa H, Sakaguchi S, Okada M, Kadoya T. The ratio of CD8+ lymphocytes to tumor-infiltrating suppressive FOXP3 + effector regulatory T cells is associated with treatment response in invasive breast cancer. Discov Oncol. 2022 Apr 19;13 (1):27.Liu Y, Gao Y, Hao H, Hou T. CD279 mediates the homeostasis and survival of regulatory T cells by enhancing T cell and macrophage interactions. FEBS Open Bio. 2020 Jun;10 (6):1162-1170.Liu Y, Gao Y, Hao H, Hou T. CD279 mediates the homeostasis and survival of regulatory T cells by enhancing T cell and macrophage interactions. FEBS Open Bio. 2020 Jun;10 (6):1162-1170.Hu Y, Zhao J, Shen Y, Zhang C, Xia Q, Zhang G, Wang B, Wei B, Yu R, Ma J, Guo Y. Predictive value of tumor-infiltrating lymphocytes detected by flow cytometry in colorectal cancer. Int Immunopharmacol. 2022 Dec;113 (Pt A): 109286.Hu Y, Zhao J, Shen Y, Zhang C, Xia Q, Zhang G, Wang B, Wei B, Yu R, Ma J, Guo Y. Predictive value of tumor-infiltrating lymphocytes detected by flow cytometry in colorectal cancer. Int Immunopharmacol. 2022 Dec;113 (Pt A): 109286.Заботина Т.Н., Черткова А.И., Борунова А.А., Захарова Е.Н., Шоуа Э.К., Артамонова Е.В., Коваленко Е.И., Хорошилов М.В., Кадагидзе З.Г. Взаимосвязь субпопуляций лимфоцитов больных раком молочной железы с результатами лечения. Российский биотерапевтический журнал. 2021;20 (3):25-33.Заботина Т.Н., Черткова А.И., Борунова А.А., Захарова Е.Н., Шоуа Э.К., Артамонова Е.В., Коваленко Е.И., Хорошилов М.В., Кадагидзе З.Г. Взаимосвязь субпопуляций лимфоцитов больных раком молочной железы с результатами лечения. Российский биотерапевтический журнал. 2021;20 (3):25-33.Hermans IF, Silk JD, Gileadi U, Salio M, Mathew B, Ritter G, Schmidt R, Harris AL, Old L, Cerundolo V. NKT cells enhance CD4+ and CD8+ T cell responses to soluble antigen in vivo through direct interaction with dendritic cells. J Immunol. 2003 Nov 15;171 (10):5140-7.Hermans IF, Silk JD, Gileadi U, Salio M, Mathew B, Ritter G, Schmidt R, Harris AL, Old L, Cerundolo V. NKT cells enhance CD4+ and CD8+ T cell responses to soluble antigen in vivo through direct interaction with dendritic cells. J Immunol. 2003 Nov 15;171 (10):5140-7.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.